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详细内容

膜片钳实验过程与结果

时间:2022-01-05     【原创】

       以培养1~7d后直径在12~14m的细胞为膜片钳实验对象,通过PC2C膜片钳放大器PClamp4.0主控软件产生5 mV阶梯脉冲波刺激信号。电极入液先进行电极充灌,并将电极固定在电极夹持器上。这时通过人工(嘴或者注射器以及三通阀),施加以正压,使得电极夹持器内腔压力大约为0.5 kPa。电极入液后在监视器下可看到电极内液缓缓外流,从而防止了因细胞浴池浴液倒吸入电极而造成电极污染。


       用微操控制仪使膜片钳电极靠近并贴附细胞(需熟练操作微操纵器接近并找到细胞),再通过人工(嘴或者注射器以及三通阀),施加一负压,使得电极夹持器内腔压力约为-3.5 kPa,调节软件上的保持电位使玻璃微电极内电位由-40mV到-90mV [1,2],这样有助于加速形成吉欧封接。观察上述几个过程的刺激信号电流曲线、电极电阻以及吉欧封接电阻,判断细胞吉欧封接情况。若观察到封接后的电阻在1-10 G,漏电流在-30 pA(经验值)以下就可以调节放大器面板的C-FAST进行快电容补偿,将电流伪迹消除。如果此时波形稳定即可进行破膜(嘴或者注射器以及三通阀),破膜的过程如用嘴则需有力短促而快速,如用注射器则需稍快的施加负压,负压大于5 kPa。并同时使用三通阀开闭配合。如吸破,则软件显示的电阻会下降一些,如果此时波形稳定即可进行慢电容补偿,补偿过程:拨动放大器面板上的Slow Range开关到10pF,然后交互调节C-Slow、G-Series使慢电容的伪迹消失波形为方波即可。此时开始记录。


膜片钳实验结果与小结:

膜片钳实验

       给电极施加0.5 kPa正压,电极入液时的电流曲线,如图4-A所示(增益为1.0 mV/pA);电极贴附细胞时的电流曲线,如图4-B所示(增益为1.0 mV/pA);给电极施加稳定持续的3.5 kPa负压时的电流曲线,如图4-C所示(增益为2.0 mV/pA)


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